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NY/T 3748-2020《水稻品种纯度鉴定 SSR分子标记法》
NY/T 3748-2020《水稻品种纯度鉴定 SSR分子标记法》是中国农业农村部发布的农业行业标准,规定了利用简单重复序列(SSR)分子标记技术鉴定水稻品种纯度的方法。以下是该标准的关键内容概要:
1. 适用范围
适用于水稻(Oryza sativa L.)品种真实性和纯度的实验室鉴定。
可用于种子质量检测、品种权保护、市场监管等领域。
2. 原理
SSR标记:基于水稻基因组中短串联重复序列(Simple Sequence Repeats)的多态性。不同品种的SSR位点重复次数不同,通过PCR扩增和电泳检测,可区分品种差异。
纯度计算:通过分析群体样本的SSR位点一致性,计算品种纯度。
3. 主要步骤
样品制备:
取待测水稻种子或叶片,提取基因组DNA(需满足纯度要求,如OD260/280=1.7~2.0)。
SSR引物选择:
使用标准中推荐的SSR引物(如RM1、RM5等),或经验证的多态性引物。
PCR扩增:
反应体系(25μL):含DNA模板、引物、Taq酶、dNTPs等。
扩增程序:预变性→循环扩增(变性-退火-延伸)→最终延伸。
电泳检测:
使用聚丙烯酰胺凝胶或毛细管电泳分离PCR产物,染色(如银染)后观察条带。
数据分析:
统计样本中目标条带的一致性,计算品种纯度(一致个体数/总检测数×100%)。
4. 结果判定
真实性鉴定:待测品种与标准样品的SSR谱带一致,判定为真实。
纯度鉴定:群体中与标准样品条带一致的个体占比≥阈值(如98%),判定合格。
5. 注意事项
引物验证:新引物需通过多品种测试确认多态性。
重复实验:异常结果需重复检测。
对照设置:每批次实验需包含阳性(标准样品)和阴性(无模板)对照。
6. 标准意义
为水稻品种纯度鉴定提供统一、科学的方法,减少主观误差。
支持种子质量监管和品种权保护,促进农业标准化。
如需全文,可查阅中国农业农村部官网或标准出版机构发布的正式文本。