DNA鉴定之微测序法

      微测序法(mini sequencing)的实质是单核苷酸引物延伸(single nucleotide primer extension，SNuPE)或单碱基延伸(single base extension，SBE)，其过程首先是用PCR扩增出含有靶SNP位点的一段DNA，然后在该产物中加入一条微测序引物在测序仪上进行碱基延伸反应，其中测序引物3 '端碱基紧邻多态性碱基，在DNA聚合酶的作用下，引物只进行一个碱基的延伸就终止反应，即只加上一个荧光标记的ddNTP就可经毛细管电泳检测出荧光信号类型而获得延伸碱基的信息。与其他方法相比，该法灵敏、重复率高，所使用的设备在大多数实验室都是常规装备，因而该法容易普及。但是微测序法也存在一定的问题，即当一个反应只检测一个SNP时其造价较高，而当一个反应检测多个SNP时又对复合PCR和延伸反应过程中历涉及的所有引物要求严格，引物结构、浓度比例、退火温度要求适当，而且其测序引物的序列往往很长，甚至可超过50mer。